如何選擇紫外分光光度計(jì)

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紫外分光光度計(jì)大量用于實(shí)驗(yàn)室研究。如何選擇和購買紫外分光光度計(jì)對于研究人員來說是很重要的。紫外分光光度計(jì)該如何選擇呢？

紫外分光光度計(jì)的選擇主要考慮光學(xué)構(gòu)造、光譜范圍、樣品類型和分析工具。

研究者們有眾多的新紫外光分光光度計(jì)可選。自從60年前紫外分光光度計(jì)出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的工作臺之后，這種能解決廣泛難題的儀器可以從單一波長的測量到高性能多光譜進(jìn)行測量分析?？茖W(xué)家們選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來考慮，光學(xué)構(gòu)造和光源、探測方法、樣品類型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素。

光學(xué)構(gòu)造（OPTICAL CONFIGURATION）

一般來說，紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類。顧名思義，單光束型主要是依賴單束光進(jìn)行測量。一束給定波長的光通過對照物，然后再通過實(shí)際樣品溶液，就能得到吸光結(jié)果。

雙光束型則是通過一個(gè)斬光輪（mirrored chopper wheel）將一束光分成兩束，分別測量對照樣品和實(shí)際樣品?？梢宰钚』馄疲╨amp drift）和減少測量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪，而是利用一種光束分光器來代替，將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測量對照樣品和目的樣品。因?yàn)樵黾恿藴y量的速度，所以雙光束分光光度計(jì)在測量一些溶液隨時(shí)間動態(tài)變化的研究中大有用處。

數(shù)據(jù)管理（DATA MANAGEMENT）

大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器，通常與PC機(jī)一起聯(lián)用，需要從制造商提供額外的軟件。同時(shí)用戶也可以選擇升級軟件以滿足他們的需要。

另外一個(gè)值得考慮的因素是數(shù)據(jù)的最終使用。各獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室都有各自感興趣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。例如一些藥物機(jī)構(gòu)需要考慮美國FDA的要求和歐聯(lián)盟的藥物評價(jià)機(jī)構(gòu)的要求選擇不同的數(shù)據(jù)處理方式。

光源和檢測方法（LIGHT SOURCES AND DETECTION）

分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長情況。例如Amersham Biosciences of Piscataway公司的GeneQuant II能在230、260、280、320、595和600nm的波長下測量樣品。如果需要更大的靈活性，研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器，可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。

紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長，通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。Varian of Palo Alto公司的Cary Deep UV和Hitachi High Technologies of Tokyo的U-7000 Automated Vacuum UV System就是這樣的儀器。

一些儀器具有多種光源供選擇：紫外光、可見光和甚至紅外光（780nm至3000nm）。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分（大約380nm到800nm）。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域。

分光光度計(jì)的帶寬（bandwidth）很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度?？梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)精確要求的光譜。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量?？勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要。

為了測量吸光值，分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管（photo-multiplier tubes，PMTs）和光敏二極管。PMTs提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度，并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。

樣品類型（SAMPLE FORMAT）

在大部分的樣品類型中，分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette、吸漿管和微孔板。微孔板主要是滿足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對于小實(shí)驗(yàn)室來說，制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來滿足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

用小試管cuvette裝樣品容量一般從1μl～5ml，并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來滿足各種改變需要。體現(xiàn)了柔韌性。